《基因克隆和DNA 分析》魏群主编，高等教育出版社，2003 年8 月二.考试内容与基本要求
第一章为什么说基因克隆与DNA 分析非常重要[考试要求]
本章要求学生了解遗传学的早期发展，掌握基因工程、基因克隆的基本概念和基因克隆的基本步骤。
[考试内容]
1.遗传学的早期发展
2.基因克隆和聚合酶链反应（PCR）的出现
3.什么是基因克隆
第二章基因克隆的载体—质粒和噬菌体[考试要求]
本章要求学生掌握质粒的基本特性和λ 噬菌体的侵染循环过程及COS 位点的作用原理。[考试内容]
1.质粒
一质粒的基本特性二 大小和拷贝数三结合性和相容性
四 质粒的种类2.噬菌体
一噬菌体的基本特性二溶源性噬菌体
三病毒在其他生物体中作为克隆载体的应用第三章从活细胞中纯化DNA
[考试要求]
本章要求学生掌握全细胞DNA制备的基本步骤；了解CTAB法和异硫氰酸胍法从植物细
胞提取DNA 的基本原理；重点掌握基于构造的分离方法中碱裂解法提取质粒DNA 的基本原理及质粒扩增的基本原理；了解噬菌体DNA 的制备的基本内容。
[考试内容]
1.全细胞DNA的制备
一细菌培养物的生长和收集二细胞提取物的制备
三从细胞提取物中纯化DNA四DNA 取样的浓缩
五DNA 浓度的测量
六从细菌以外的生物体制备全细胞DNA2. 质粒DNA 的制备
一基于分子大小的分离二基于构造的分离
三质粒扩增
3.噬菌体DNA的制备
一培育培养物以获得高λ密度二非溶源性λ噬菌体的制备
三从被侵染培养物中收集噬菌体四从λ噬菌体颗粒中纯化DNA
五M13 噬菌体DNA 的纯化带来的几个问题λ噬菌体第四章DNA纯化后的利用
[考试要求]
本章要求学生掌握DNA 操作酶及其作用特点；掌握限制性内切酶的性质和作用原理；掌握限制性内切酶在实验室条件下进行酶切及对酶切结果进行分析；DNA 连接酶的作用模式和如何将粘末端加在平末端分子上。
[考试内容]
1. DNA 操作酶的范围一、核酸酶
二、连接酶三、聚合酶
四、DNA修饰酶五、拓扑异构酶
2. 切割DNA 的酶限制性内切酶
一、限制性内切酶的发现和其功能
二、限制性内切酶Ⅱ在特定的核苷酸序列处切割DNA三、平末端和黏末端
四、DNA 分子中识别序列的出现频率五、在实验室条件下进行限制性酶切 六、对限制性酶切的酶切结果进行分析七、DNA分子大小的估计
八、通过作图标出一个DNA分子上的不同限制性酶位点3.连接——将DNA分子连接到一起
一、DNA 连接酶的作用模式二、黏末端可增加连接的效率
三、将黏末端加在平末端分子上第五章将DNA引入活细胞
[考试要求]
本章要求学生掌握大肠杆菌感受态细胞的制备和转化细胞的选择方法；掌握重组体的鉴定方法之一抗生素抗性基因插入失活的方法和基本原理；掌握重组体的鉴定方法之二
---lacZ‘基因的插入失活的方法和基本原理；掌握将噬菌体DNA引入细菌细胞的方法。
[考试内容]
1.转化——使细菌细胞获取DNA基因
一、并非所有种类的细菌都以相同的效率获取DNA二、大肠杆菌感受态细胞的制备
三、对转化细胞的选择2.重组体的鉴定
一、pBR322 重组体的筛选—抗生素性基因的插入失活二、插入失活不仅仅针对于抗生素抗性
3.将噬菌体DNA引入细菌细胞
一、转染二、体外包装
三、琼脂培养基上的噬菌斑是噬菌体侵染的可视化形式第六章大肠杆菌的克隆载体
[考试要求]
本章要求学生掌握大肠杆菌的克隆载体、M13 噬菌体的克隆载体及λ噬菌体的克隆载体的性质和用途；掌握λ噬菌体的克隆载体的性质和用途；了解构建基因组文库的基本步骤和大容量克隆载体及其他细菌的克隆载体。
[考试内容]
1. 基于大肠杆菌质粒的克隆载体一、质粒克隆载体的命名法
二、pBR322的一些有用特性三、pBR322的家谱
四、基于大肠杆菌质粒的克隆载体 五、其他典型的大肠杆菌质粒克隆载体
2. 基于 M13 噬菌体的克隆载体一、M13mp2克隆载体的开发
二、M13mp7—对称的克隆位点三、更复杂的M13载体
3.基于入噬菌体的克隆载体
一可以从λ 噬菌体基因组移除部分片段而不损伤其生存能力二可以用自然选择来筛选那些缺少酶切位点的λ噬菌体
三插入载体和置换载体
四用λ插入载体或置换载体进行克隆实验
五可以用黏端质粒对非常大的DNA片段进行克隆
4.入载体和其他高容量的载体使基因组文库得以建立
5. 其他细菌的克隆载体第七章真核生物的克隆载体
[考试要求]
本章要求学生重点掌握基于2μm质粒构建的母克隆载体的结构和用途、高等植物的克
隆载体中根癌农杆菌转化法的基本知识；掌握高等植物的克隆载体中根癌农杆菌转化法的；了解外源DNA的直接转化法和动物克隆载体的使用。
[考试内容]
1. 酵母和其他真菌的载体一、2μm质粒的筛选标记
二、基于2μm质粒的载体—酵母游离型质粒三、YEp可以插入酵母的染色体DNA
四、其他类型的酵母克隆载体
五、可以用酵母人工染色体来克隆大片段DNA六、其他酵母和真菌载体
2. 高等植物的克隆载体一、根癌农杆菌—自然界小的遗传工程师
二、用直接转化法在植物中克隆基因三、用植物病毒作克隆载体的尝试
3. 动物的克隆载体一、昆虫的克隆载体
二、在哺乳动物中克隆基因
第八章怎样获得特定基因的克隆[考试要求]
本章要求学生重点掌握直接筛选目的基因的方法和策略、标志获救的定义以及标志获救的范围与局限。
[考试内容]
1.筛选的难题